一、病毒保存液
病毒保存液適用于新型冠狀病毒、流感病毒、手足口病毒等常見病毒樣本采集保存運輸工作,是采樣管內浸末采樣拭子病毒樣本一種保護病毒的被檢測物質的液體,可采集咽拭子、鼻拭子或特定部位組織樣本,儲存的樣本可用于后續(xù)的核酸提取或純化等臨床實驗。通常分為兩種,一種是非滅活型,能夠保護病毒的蛋白和核酸,另一種是滅活型,通常含有滅活病毒的裂解鹽,裂解蛋白而保護核酸。
1、滅活型:添加有裂解鹽的病毒保存液就是滅活型的病毒保存液,里面含有的Tris、裂解鹽、EDTA等主要目的是裂解核酸而釋放出核酸,從而通過后續(xù)的實時熒光RT-PCR進行核酸檢測,以此判斷樣本是否含有病毒特征核酸,即是否感染病毒。
核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩類,是生命的最基本物質之一。病毒結構單一,就只含有一種核酸和蛋白質,因此檢測出特征核酸就檢測除了病毒。病毒屬于寄生生物,采樣后體外無法存活,如果不能及時檢測,就需要放入病毒保存液中。為了保護病毒檢測環(huán)境的安全性,就需要加入裂解鹽來滅活病毒,釋放出可以被檢測的核酸即可。2、非滅活型:除了滅活型的病毒保存液,德晟研發(fā)生產的還有非滅活型病毒保存液,不含裂解鹽,但是保存的病毒完整性更好,檢出率更高,除了核酸檢測外還可以用于其他研究。 滅活型病毒保存液則使用上更安全,操作環(huán)境要求也不用那么嚴格,各有各的優(yōu)勢,目前研究的非滅活病毒保存液的成分主要為Hank's液基礎,在Hank's液基礎之上,德晟還添加了諸如慶大霉素、真菌抗生素、BSA(牛血清白蛋白第五組分)、生物緩沖劑HEPES、氨基酸、冷凍保護劑、甘油等多種組分。
3、病毒樣本采集方法:
a .鼻拭子:將1根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子輕輕插入鼻道內鼻腭處,停留片刻后緩慢轉動退出。取另一根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子以同樣的方法釆集另一側鼻孔。上述兩根拭子浸入同一含3成釆樣液的管中,尾部棄去,旋緊管蓋。
b.咽拭子:用2根聚丙烯纖維頭的塑料桿拭子同時擦拭雙側咽扁桃體及咽后壁,將拭子頭浸入含3ml病毒保存液(也可使用等滲鹽溶液、組織培養(yǎng)液或磷酸鹽緩沖液)的管中,尾部棄 去,旋緊管蓋。
c.鼻咽抽取物或呼吸道抽取物:用與負壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液或從氣管抽取呼吸道分泌物。將收集器頭部插入鼻腔或氣管,接通負壓,旋轉收集器頭部并緩慢退出,收集抽取的粘液,并用3ml采樣液沖洗收集器1次(亦可用小兒導尿管接在50ml注射器上來替代收集器)。
二、細胞保存液:
通常所說的細胞保存液是一種通用型的細胞凍存液,可用于凍存人和各種動物細胞株;細胞凍存是細胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實驗順利進行的重要技術手段。在細胞建株和建系中,及時凍存原始細胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過程中,雜交瘤細胞、每次克隆化得到的亞克隆細胞的凍存保種常常是必不可少的實驗操作。因為在沒有建立一個穩(wěn)定的細胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細胞系的時候,細胞的培養(yǎng)過程中隨時可能因細胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等等導致實驗失敗,如果沒有原始細胞的凍存,則因為上述的意外而前功盡棄。
細胞保存液優(yōu)點:目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷;非程序降溫,-80℃低溫冰箱凍存長達5年,可以確保凍存細胞安全;可孔板(細胞培養(yǎng)板)凍存,可用于雜交瘤細胞的凍存液.細胞保存液具有稀釋作用,能分離出大量包埋在粘液中的有效細胞,使更多有檢驗價值的細胞被保存下來,提供充足的細胞數量,為檢驗結果的準確提供保證;同時,處理后的樣品經低速離心過濾后能徹底清除樣本中的粘液,有效防止粘液對樣品檢驗結果的干擾。細胞保存液經過低速離心后可制成均勻單層的細胞薄片,達到檢驗要求。