第三期｜友康GMP級(jí)MSC無(wú)血清培養(yǎng)基開(kāi)發(fā)元宇宙——核型檢測(cè)篇

前兩期文章我們談到了友康GMP級(jí)間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基的開(kāi)發(fā)思路和它培養(yǎng)出來(lái)的MSC的細(xì)胞干性-特征?；瘜W(xué)成分完全限定、傳代能力強(qiáng)、可產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)這三個(gè)優(yōu)勢(shì)可以讓我們的客戶在藥物申報(bào)以及臨床研究中把安全風(fēng)險(xiǎn)盡可能地降低。我們還通過(guò)詳細(xì)的數(shù)據(jù)展示了這款GMP級(jí)無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)出來(lái)的間充質(zhì)干細(xì)胞的基本特性，貼壁能力的加強(qiáng)、表面標(biāo)志物及三系分化的穩(wěn)定，顯示出了這款產(chǎn)品在MSC基本質(zhì)量中的穩(wěn)定性。

間充質(zhì)干細(xì)胞從開(kāi)始培養(yǎng)到進(jìn)入新藥臨床試驗(yàn)階段，需要進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)和有效性評(píng)價(jià)，這就需要對(duì)我們培養(yǎng)出來(lái)的MSC做很多質(zhì)量上的檢測(cè)。今天這期內(nèi)容我們就圍繞MSC細(xì)胞的染色體核型檢測(cè)來(lái)展開(kāi)討論。

一、關(guān)于核型分析

染色體是細(xì)胞分裂期高度凝集的DNA蛋白質(zhì)纖維，是間期染色質(zhì)結(jié)構(gòu)緊密盤繞折疊的結(jié)果。

核型是指一個(gè)細(xì)胞的染色體按其大小、形態(tài)特征排列起來(lái)構(gòu)成的圖像。

染色體標(biāo)本經(jīng)顯帶技術(shù)處理，可使染色體長(zhǎng)軸上顯示出明暗或深淺相間的帶紋，每條染色體都有獨(dú)特而恒定的帶紋。

染色體核型分析是一種細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)，可以識(shí)別染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)異常，需要將待檢細(xì)胞進(jìn)行染色體數(shù)目、形態(tài)結(jié)構(gòu)分析，確定其核型是否與正常核型一致。目前G顯帶（G Banding）染色體核型分析技術(shù)仍然是行業(yè)內(nèi)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。

二、核型分析的意義

間充質(zhì)干細(xì)胞不管是直接用于治療還是開(kāi)發(fā)成干細(xì)胞制劑，都必須保證MSC的安全性。首先，MSC的來(lái)源比較多，常見(jiàn)的有脂肪、骨髓、臍帶等，有可能因?yàn)榧?xì)胞來(lái)源問(wèn)題，存在異常染色體核型。此外，長(zhǎng)時(shí)間體外培養(yǎng)，也有可能導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)基因變異或染色體異常。

研究表明，核型異常有可能使MSC的應(yīng)用存在致瘤風(fēng)險(xiǎn)。因此，在美國(guó)食品藥品管理局(FDA)關(guān)于MSC的應(yīng)用程序中安全性評(píng)估提出了對(duì)MSC染色體核型檢測(cè)的要求，同時(shí)核型分析的異常結(jié)果比癌基因的表達(dá)特異性更高，因此在細(xì)胞治療資格認(rèn)證中進(jìn)行核型分析非常重要。

三、常見(jiàn)核型分析的問(wèn)題

在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，間充質(zhì)干細(xì)胞隨著傳代的代次增加，有可能會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞的衰老以及染色體變異-。常見(jiàn)的比如：細(xì)胞出現(xiàn)染色單體和染色體斷裂，染色體結(jié)構(gòu)異常，出現(xiàn)超二倍體、亞二倍體以及多倍體，還可能出現(xiàn)染色體的缺失、重復(fù)、倒位、易位等情況。這些異常核型問(wèn)題都有可能影響到間充質(zhì)干細(xì)胞的安全性。

由于體外培養(yǎng)體系與體內(nèi)環(huán)境并不相同，在連續(xù)傳代擴(kuò)增的條件下MSC能否保持染色體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，是其臨床應(yīng)用安全性的重要指標(biāo)之一。大量研究表明，染色體結(jié)構(gòu)的異常與各類腫瘤的發(fā)病密切相關(guān)，由于MSC移植可能存在致瘤風(fēng)險(xiǎn)，而腫瘤的發(fā)生與細(xì)胞染色體互易、缺失、插入和倒位等核型的異常改變關(guān)系密切。所以染色體核型檢測(cè)對(duì)于間充質(zhì)干細(xì)胞非常重要，可以精準(zhǔn)地判斷細(xì)胞是否出現(xiàn)任何變異或者是功能上出現(xiàn)異常，核型檢測(cè)能夠保證MSC應(yīng)用的安全性。

四、友康GMP級(jí)培養(yǎng)基產(chǎn)出細(xì)胞核型分析結(jié)果

在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，MSC有從組織微環(huán)境到體外培養(yǎng)環(huán)境的一個(gè)調(diào)整和適應(yīng)的過(guò)程，一部分不適應(yīng)的細(xì)胞會(huì)被淘汰，所以在前兩三代，干細(xì)胞基因組有著不穩(wěn)定的因素，因此我們選取P5代次進(jìn)行核型分析。

在核型分析的五個(gè)指標(biāo)里，染色單體和染色體斷裂、結(jié)構(gòu)異常、超二倍體、亞二倍體及多倍體之中，都遠(yuǎn)小于《中華人民共和國(guó)藥典》給出的參考值，由此可以看出使用友康GMP級(jí)培養(yǎng)基得到的MSC的細(xì)胞核型是非常穩(wěn)定的，其核型檢測(cè)完全符合人源性干細(xì)胞產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則中的要求，細(xì)胞標(biāo)本異常率完全處于安全參考值范圍內(nèi)，基本不存在染色體異常和遺傳突變的情況，安全性值得信賴。

P5代次細(xì)胞核型分析報(bào)告

46，XX克隆核型及中期圖

本期文章我們?cè)敿?xì)分析了細(xì)胞核型分析對(duì)于臨床應(yīng)用和藥物申報(bào)的意義，通過(guò)詳細(xì)的數(shù)據(jù)展示了友康GMP級(jí)MSC無(wú)血清培養(yǎng)基在細(xì)胞核型檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)。在接下來(lái)的內(nèi)容中，我們將分享這款GMP級(jí)培養(yǎng)基在細(xì)胞檢測(cè)學(xué)上展現(xiàn)出來(lái)的更多優(yōu)勢(shì)。