友康生物
2023-04-19
公司熱點前幾期文章我們詳細介紹了間充質(zhì)干細胞（MSC）在細胞的基本干性、核型檢測、免疫抑制與調(diào)節(jié)能力等方面的特性，還用真實數(shù)據(jù)展示了友康GMP級MSC無血清培養(yǎng)基在支持MSC的這些特性上具有良好的性能。
本期文章我們?nèi)匀粡腗SC的質(zhì)量檢驗上入手，分析MSC在端粒酶活性檢測中的實驗結(jié)果，進一步展示這款GMP級培養(yǎng)基的安全性能。
一、端粒與端粒酶
端粒是真核細胞染色體末端的特殊結(jié)構(gòu)。端粒有重要的生物學功能，可穩(wěn)定染色體的功能，防止染色體DNA降解、末端融合，保護染色體結(jié)構(gòu)基因DNA，調(diào)節(jié)正常細胞生長。端粒長短和穩(wěn)定性決定了細胞壽命，并與細胞衰老和癌變密切相關(guān)。
端粒酶是一種由催化蛋白和RNA模板組成的酶，可將端粒DNA加至真核細胞染色體末端，把DNA復制損失的端粒填補起來，使端粒修復延長，可以讓端粒不會因細胞分裂而有所損耗，使得細胞分裂的次數(shù)增加。
二、端粒酶活性檢測的意義
端粒酶活性檢測是MSC的致瘤性檢驗中的一項。端粒酶與細胞的增生、分化和不死性有著極為密切的關(guān)系，已成為目前腫瘤和衰老基礎研究的熱點之一。端粒酶除了在少數(shù)分裂比較快的細胞（如生殖細胞、造血細胞）中表達，一般在正常細胞中不表達，在大多數(shù)惡性腫瘤組織有較高水平表達。
理論上機體任何一個組織均有發(fā)生腫瘤的可能，臨床上對MSC來源的腫瘤知之尚少，目前的研究指向人體的尤文氏瘤等骨肉瘤系來源于MSC。目前多數(shù)的研究報道認為采用原代、P1~P3 的MSC進行治療，可避免其致瘤性的發(fā)生。為了更進一步避免MSC致瘤的可能性，我們就要對細胞進行致瘤性檢驗，確保應用到臨床和研究上的細胞是安全可靠的，而端粒酶活性與細胞癌變的發(fā)生密切相關(guān)，該項檢測也就成了其中不可缺少的檢驗之一。
端粒酶活性檢測標準 |
廣東省干細胞與再生醫(yī)學協(xié)會團體標準-人臍帶間充質(zhì)干細胞質(zhì)量檢定標準(T/SRA 003-2019): 采用逆轉(zhuǎn)錄real-time PCR 方法通過PCR儀檢測其是否表達端粒酶催化亞基基因 hTERT。hTERT 是端粒酶的核心，只表達于端粒酶陽性細胞，并且是端粒酶的限速因子，其 mRNA表達水平直接決定端粒酶的活性程度。采用實時定量熒光PCR的方法檢測臍帶間充質(zhì)干細胞應無端粒酶(或非常微弱)表達。 深圳市細胞治療技術(shù)協(xié)會團體標準-臨床研究用人臍帶來源間充質(zhì)干細胞制劑規(guī)范(SZTT/SSCT 002-2018)：產(chǎn)品的兩代次細胞端粒酶活性差異≤10%。 |
三、友康GMP級培養(yǎng)基產(chǎn)出細胞實驗結(jié)果
為了確保友康的GMP級MSC無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)出的細胞的安全性，我們選取了P5代次的細胞進行了端粒酶活性檢測，檢測結(jié)果為陰性，這表明友康的這款GMP級培養(yǎng)基在致瘤性檢驗中是安全的，極大程度降低了致瘤性發(fā)生的可能。
端粒的長短與細胞的衰老有著密切的關(guān)系，端粒越長細胞增殖能力越強，越不容易老化，端粒酶可以維持細胞的端粒穩(wěn)定性。我們檢測到的端粒酶活性為陰性，這是否說明了這款培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的細胞容易老化、增殖能力弱呢？
并非如此，在本系列第二期文章中，我們展示了這款GMP級培養(yǎng)基培養(yǎng)出來的細胞形態(tài)圖，哪怕是高代次的時候細胞也具有很好的形態(tài)，沒有老化的征象，而且無需更換培養(yǎng)基，可以一傳到底傳至P20代次。這就說明了，細胞的安全性和它的增殖能力并不是負向的關(guān)系，而是可以兼顧的。
參考文獻
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黃金棋,林艷娟. 間充質(zhì)干細胞治療自身免疫性疾病及其細胞生物治療的致瘤性[J]. 中國組織工程研究與臨床康復,2010,14(45):8478-8482.
