窺尋友康GMP級(jí)玻璃化細(xì)胞凍存液，淺談細(xì)胞凍存技術(shù)——傳統(tǒng)凍存方法的安全問題

本期文章將從DMSO和血清等成分的安全性出發(fā)，來分析常見細(xì)胞凍存液存在的安全性問題。

DMSO是一種極為重要的非質(zhì)子極性溶劑，既溶于水又溶于有機(jī)溶劑，被譽(yù)為“萬能溶劑”，因此作為溶劑和實(shí)驗(yàn)反應(yīng)試劑被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、科研等許多領(lǐng)域。

目前DMSO已經(jīng)成為細(xì)胞凍存的經(jīng)典保護(hù)劑，然而它的安全性問題仍然存在一定爭(zhēng)議。有毒理學(xué)數(shù)據(jù)表明，DMSO是一種微毒類的化學(xué)試劑，存在著急性和慢性毒性。然而，國內(nèi)外有關(guān)DMSO的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及人體試驗(yàn)的結(jié)果均顯示：DMSO屬于低毒物質(zhì)?臨床應(yīng)用一定劑量的 DMSO不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生毒性，可以無需洗滌直接進(jìn)行臨床注射。

此外，在美國DMSO仍然處于藥品應(yīng)用的邊緣線?美國FDA對(duì)于DMSO的要用要求十分嚴(yán)格，目前FDA尚未批準(zhǔn)保護(hù)劑DMSO用于臨床輸注，并沒有藥用注射級(jí)別的DMSO產(chǎn)品。除此之外?DMSO在臨床的應(yīng)用是受限的?因?yàn)榕R床試驗(yàn)顯示患者應(yīng)用DMSO后?不同的患者表現(xiàn)出了不同程度的臨床毒性。這提示了DMSO雖然對(duì)健康的個(gè)體沒有毒性?但是對(duì)于臨床患者?DMSO是否有毒性及其毒性程度的高低均有待于進(jìn)一步的研究。

因此，相對(duì)來說一款不含DMSO的細(xì)胞凍存液恰好能解決DMSO帶來的安全性和相關(guān)審批問題，更有助于藥物申報(bào)工作的順利進(jìn)行。

二、血清體系的安全隱患

一般冷凍保存的細(xì)胞仍然存在緩慢的細(xì)胞生長，所以常見的凍存液中都會(huì)添加一定比例的血清（FBS），可供給細(xì)胞營養(yǎng)、增殖細(xì)胞因子、穩(wěn)定培養(yǎng)液pH值及營造高濃度蛋白狀態(tài)，對(duì)保護(hù)細(xì)胞有重要意義。

然而，這種凍存液含有動(dòng)物來源的FBS，有無法消除的安全隱患。FBS為異種血清，且其成分不明確，而且存在病原體傳播和免疫反應(yīng)的潛在風(fēng)險(xiǎn)，直接應(yīng)用于臨床有很大的安全隱患。此外，還有血清批次間的差異波動(dòng)、來源不穩(wěn)定等各種原因，使用前需要進(jìn)行大量的驗(yàn)證工作，因此會(huì)導(dǎo)致生產(chǎn)和科研工作變得非常復(fù)雜。而且如果已經(jīng)采用無血清體系來培養(yǎng)細(xì)胞，卻使用了含有血清的凍存液，引入了血清，那將是沒有意義的失誤。

高品質(zhì)血清的稀缺性導(dǎo)致其價(jià)格昂貴

從經(jīng)濟(jì)性角度考慮，真正適用于臨床研究的特級(jí)胎牛血清和優(yōu)等胎牛血清由于其稀缺性而價(jià)格高昂。而隨著動(dòng)物血制品的價(jià)格頻頻上漲，很多實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)為買不到合適的血清而苦惱，血清供應(yīng)商也經(jīng)常出現(xiàn)斷貨的現(xiàn)象。此外，血制品市場(chǎng)也由于其高昂的利潤滋生了不少行業(yè)亂象，這也會(huì)影響到實(shí)際使用含血清產(chǎn)品的科研人員。

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綜合考量，我們考慮到血清體系的復(fù)雜性、安全問題以及優(yōu)質(zhì)血清的高昂價(jià)格等情況，選擇一款不含血清、無動(dòng)物源成分的細(xì)胞凍存液可以從根本上幫我們解決這些問題。

細(xì)胞凍存液中加入DMSO和血清，確實(shí)是一種使用非常廣泛、效果非常好的細(xì)胞凍存保護(hù)方法，但考慮到其安全性尚待進(jìn)一步探索，應(yīng)用在臨床上，還是要慎之又慎。相反，選擇一款無DMSO、無血清、無動(dòng)物源成分、安全有效、化學(xué)成分限定的細(xì)胞凍存液，應(yīng)用于臨床研究和藥物申報(bào)，對(duì)于我們來說實(shí)際上是一種更有把握、更順利開展工作的選擇。

參考資料