細胞凍存是指將細胞放在低溫環(huán)境,以達到減少細胞代謝的作用,從而達到對細胞進行長期儲存進行保種的目的,以供后續(xù)實驗或臨床使用。
目前,細胞凍存主要的技術為液氮冷凍法,實際凍存過程中,需要進行梯度溫度凍存,并加入適量的保護劑以保證細胞內(nèi)外的水分不會形成冰晶造成細胞的損傷或死亡。
在準備冷凍靶細胞之前,必須確保細胞處于最佳生長狀態(tài),這可以通過以下指標進行觀察:
1、培養(yǎng)基的顏色和渾濁情況:
培養(yǎng)基的顏色可以指示細胞是否過度生長(例如,如果細胞是黃色,則表示它們過度生長);介質(zhì)的渾濁度通常表明存在污染,不適合冷凍。
2、細胞培養(yǎng)的時間:
通常,建議將新恢復的細胞冷凍約兩周。如果細胞連續(xù)培養(yǎng)兩個月以上,性狀率會發(fā)生一些變化,此時的細胞不適合冷凍。
3、細胞的數(shù)目:
在凍存過程中,每只凍存管內(nèi)細胞最佳濃度為5x10^6個/ml—1x10^7個/ml,高密度或低密度對細胞存活率有一定影響。當細胞數(shù)量不足時,不建議冷凍細胞。