無菌檢測中的樣本設(shè)置到底有哪些門道？

（1）陽性對照

陽性對照：就像考試?yán)锏臉?biāo)準(zhǔn)答案。它是已知含有目標(biāo)微生物核酸的樣本，用來證明整個檢測系統(tǒng)是正常工作的。如果它檢測出來是陽性，那就說明檢測方法、儀器、試劑等都沒啥問題，能準(zhǔn)確檢測出目標(biāo)微生物。要是它沒顯示陽性，那可能是檢測過程出了岔子，比如試劑失效、儀器故障等，得排查原因。

（2）陰性對照

陰性對照：相當(dāng)于空白試卷。一般是選取沒有目標(biāo)微生物的樣本，像同類型無污染樣品或者PCR稀釋液。它的作用是看看檢測過程中有沒有受到外來微生物核酸的污染。要是陰性對照檢測出陽性，那就說明實(shí)驗(yàn)過程被污染了，比如操作環(huán)境不潔凈、耗材帶菌等，這樣測出來的其他樣本結(jié)果也不可信，得重新做。

（3）無模板對照

無模板對照：類似不寫答案的試卷。它里面沒有加任何樣本核酸，只有反應(yīng)液等試劑。主要是檢測試劑本身有沒有被目標(biāo)微生物核酸污染。要是它檢測出陽性，那就說明檢測試劑被污染了，得換干凈的試劑重新檢測。

（4）內(nèi)參對照

內(nèi)參對照：好比考試?yán)锏膮⒖紭?biāo)準(zhǔn)。在樣本處理時加入，貫穿整個檢測過程。它可以監(jiān)控樣本提取、反應(yīng)體系等環(huán)節(jié)是不是正常，還能校正實(shí)驗(yàn)中的一些誤差，比如不同樣本在提取核酸效率上的差異等，讓檢測結(jié)果更可靠、更準(zhǔn)確。

（1）檢測對象不同

FAM通道：就像個 “目標(biāo)小偵探”，專門用來檢測目標(biāo)微生物的熒光信號。比如在檢測支原體的實(shí)驗(yàn)里，它負(fù)責(zé)找出支原體的熒光信號，來判斷樣品里有沒有支原體。

HEX通道：類似 “內(nèi)部監(jiān)督員”，主要檢測內(nèi)控對照的熒光信號。內(nèi)控對照是用來監(jiān)測整個qPCR反應(yīng)是不是正常進(jìn)行的。要是它的信號不對，可能說明實(shí)驗(yàn)過程出問題了，比如DNA抽提沒做好或者qPCR反應(yīng)受到抑制。

ROX通道：通常作為 “校準(zhǔn)小助手”，用于校正熒光信號。因?yàn)樵趒PCR 實(shí)驗(yàn)中，不同反應(yīng)管之間可能會有一些細(xì)微差異，ROX通道的熒光信號可以幫助校準(zhǔn)這些差異，讓檢測結(jié)果更準(zhǔn)確。

（2）熒光特性不同

它們所使用的熒光基團(tuán)不一樣，發(fā)出的熒光顏色和波長也有差別。FAM、HEX、ROX分別對應(yīng)不同的熒光特性，這也是儀器能區(qū)分它們信號的原因。在實(shí)驗(yàn)里，儀器會根據(jù)這些不同的熒光特性，分別去檢測和分析對應(yīng)通道的信號，從而得到不同的檢測信息。