RNA提取真正需要注意的要點注意以下幾點:
1、你的植物組織樣品取樣和保存正常嗎?最近,幾個學生把樣品磨成粉末,放在-80℃的冰箱里。提取時,試劑盒和trizol都是降解的。事實上,原因很簡單。研磨過程破壞細胞壁細胞膜,RNase釋放。RNA不能降解嗎?因此,取樣后,直接冷凍至-80℃,不要研磨;必須研磨成粉末,但必須與裂解液混合,然后冷凍至-80℃。
2、需要注意的是,樣品的起始量不應超過裂解液的10%(如50mg樣品+500ul裂解液)。一方面,破壁不足,細胞膜裂解不足,RNA不釋放到裂解液中,產量肯定不高!另一方面,他們必須釋放多少內源性RNase?裂解液不能完全抑制RNase的酶活性,RNA的降解是不可避免的。
3、還有一個非常重要的一點:你的電泳池既跑DNA又跑RNA嗎?長期這樣做會導致RNase在電泳池中的積累。奇怪的是,它能跑出一條好的條帶?
4、液體轉移時吸收沉淀嗎?吸水相遇到中間層嗎?其實只吸80%的清量就夠了,RNA純度會很高,沒必要追求高產量,只要能滿足下游實驗的要求就夠了。